杨采妮幼年时成长于香港,父亲是上海人,母亲是台湾人。中学就读于德望学校,在十五岁时前往美国念书,三年后回到香港。
1992年,杨采妮签约成为EMI唱片公司的歌手;同年发行第一张唱片《爱的感觉》,夺得十大劲歌金曲“最佳新人金奖”;同年,参演的电视剧《现代爱情恋曲》播出。
1993年,与张国荣、张学友、林青霞、张曼玉、梁朝伟、刘嘉玲合作拍摄王家卫导演的电影《东邪西毒》;7月15日,参演的电影《超级学校霸王》上映,在片中饰演采妮;9月30日,参加的综艺《最佳女主角》播出。
1994年,与吴奇隆合作,拍摄徐克导演的古典民间电影《梁祝》;7月14日,参演的电影《94独臂刀之情》上映,在片中饰演小莲;10月6日,参演的电影《霓虹光管高高挂之女子公寓》上映,在片中饰演Ken。
1995年4月,参演徐克监制并导演的电影《花月佳期》,饰演洪欣欣;7月1日,参演的电影《鼠胆龙威》上映,在片中饰演Joyce;同年9月,参演王家卫执导的电影《堕落天使》上映,饰演Charlie/Cherry;11月1日,参演的电影《新扎师兄追女仔》上映,在片中饰演江美丽。
1996年,杨采妮在电影《冒险王》中饰Yvonne一角。
1997年,杨采妮与刘嘉玲合作主演张之亮导演的电影《自梳》,在剧中杨采妮饰演意欢,与刘嘉玲在片中有断背之情;6月26日,参演的电影《完全结婚手册》上映,在片中饰演珍妮特;7月26日,参与配音的电影《小倩》上映;8月9日,参演的电影《神偷谍影》上映,在片中饰演Sam;同年,宣布隐退,与新加坡籍男友邱韶智共同发展形象顾问事业;11月13日,参演的电影《热血最强》上映,在片中饰演Fanny Chan;同年,参演的电视剧《在相逢的季节》播出,饰演杨幼捷。
2003年,杨采妮复出演艺圈;同年拍摄成龙主演的电影《新警察故事》,饰演脸上有了一块疤痕的孙可颐。
2005年7月,与甄子丹、黎明、孙红雷等联袂主演徐克执导电影《七剑》,饰演武元英;10月,与刘德华、蔡卓妍主演电影《再说一次我爱你》。
2006年12月1日,参演的电影《父子》上映,在片中饰演阿莲。
2008年9月5日,参演的电影《曼谷杀手》上映,在片中饰演丰。
2010年7月5日,参演的电视剧《钟无艳》播出;10月,参演的硬派警匪动作电影《西风烈》上映,杨采妮在片中留短发,并驰骋马背,一改玉女形象;同年,获得星尚大典星尚演艺先锋人物。
2011年10月27日,参演的电影《梦游》上映,在片中饰演欧碧淇。
2013年5月24日,杨采妮用五年时间执导的徐克、张之亮监制的电影《圣诞玫瑰》全国公映,影片通过一宗性侵害案件折射出人性百态,这是杨采妮首次担任电影导演。
2012年5月18日,参演的电影《浮城大亨》上映,在片中饰演阿娣;6月1日,参演的电影《37》上映,在片中饰演尚于;11月8日,参演的电影《寒战》上映,饰演梁紫薇。
2014年10月31日,参演的电影《一个人的武林》上映,在片中饰演陆玄心;11月30日,杨采妮获第九届亚洲国际青少年电影节杰出演员奖。同年,凭借电影《寒战》获得第32届大众电影百花奖最佳女配角提名。
2016年,参演警匪巨制《寒战2》。
2019年9月20日,主演的治愈动物电影《小Q》上映,在剧中饰演陈太太。
2022年2月1日,主演的电影《嗨!神兽》定档在中国台湾上映。
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