郑佳欣出生于惠来县一户普通的工薪家庭,母亲是幼儿园教师,父亲是音乐爱好者。受父母影响,郑佳欣自幼向往艺术殿堂,梦想当一名明星。
1991年,刚初中毕业的她放弃了上高中或其它中专的选择,考上汕头文化艺术学校群艺系。在校期间她便开始客串拍广告片,并于1994年参与了警匪片《警魂》的拍摄。
1995年,郑佳欣参加高考并报考了中央戏曲学院,但因普通话不纯正而落榜。1996年,郑佳欣再次报考,最终以专业分数全国第二名的优异成绩考进了北京电影学院表演系,成为黄晓明、陈坤的同班同学。
1996年,来到北京的郑佳欣接拍第一部电视剧《梦醒五棵柳》,在剧中演一个东北农村女孩,该剧获得了飞天奖,她也因此开始了演艺之路。
1998年4月,参与拍摄古装清朝喜剧《还珠格格》,饰演抛绣球相亲的杜家小姐杜若兰;同年,出演历史剧《戊戌风云》。
1999年,出演古装武侠剧《小李飞刀》,饰演冷艳媚人的美人林仙儿,并开始受到大众关注。2000年,与王学圻、何赛飞合作主演都市情感剧《爱是阳光》,在剧中饰演放荡的反叛女孩李冠英。2002年,与洪金宝合作主演警匪剧《特警飞龙》,饰演美艳阴毒的黑社会女老大倪虹。
2004年1月,主演惊悚动作片《古宅魅影》;2月,与王刚、王思懿合作主演的古装历史剧《倚天钦差》在央视播出,她在剧中饰演胭脂一角。
2005年1月,与周浩东合作主演剧情片《西域情仇》;5月,出演家庭伦理剧《哑巴新娘》,饰演性格坚强叛逆的青楼女子苏凤;12月,出演爱情奇幻电影《情癫大圣》,在片中饰演一位蜥蜴美女。
2007年,与俞小凡合作主演古装爱情剧《媳妇的眼泪》,在剧中一人分饰春喜和晓倩两个角色。
2010年,出演古装悬疑剧《龙行天下之糊涂县令妙钦差》,饰演乌夫人湘琴。2011年,出演古装武侠剧《龙游天下》第三部,再度与杜军泽饰演一对夫妻。2013年,郑佳欣出演的古装剧《龙巡天下之断臂观音》播出,她则在剧中饰演隐忍贤良的传统妇女心兰。
2015年,郑佳欣与“96明星班”首次合体,并集体出演都市轻喜剧《虎妈猫爸》。
2016年1月,与马少骅、关晓彤合作主演励志年代剧《搭错车》,饰演身陷“家暴”的返乡知青佟燕。随后,受邀出席中国青少儿短片艺术大赛颁奖典礼,为获奖选手开奖。
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